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            實驗室培養基的制備方法

            2020-09-30

              正確制備培養基時微生物檢驗的最基礎步驟之一。使用脫水培養基和其他成分,尤其是含有有毒物質(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應遵守良好實驗室規范和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確制備會導致培養基出現質量問題。


              使用商品化脫水合成培養基制備培養基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關數據,如質量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。


              使用各別成分制備培養基時,應按照配方準確配制,記錄所有細節信息,如;培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便潮源。


              1.水


              除特定要求,實驗室用水的電導率在25℃下應不高于25uS/cm(相當于電阻率≥0.4MΩcm)。


              微生物污染應不超過103CFU/mL,較好低于102CFU/mL。應根GB/T 5750.12或其他有效方法,定期檢驗微生物的污染。


              2.稱量和復水


              稱量所需量的脫水培養基(注意防止吸入粉末,尤其是含有有害物質的培養基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培養基結塊)后再加水至所需的量。


              3.溶解和分裝


              脫水培養基加水后適當加熱,并不攪拌使其快速溶解,必要時,重新溶解。含瓊脂的培養基在加熱溶解前應浸泡幾分鐘。


              4.pH的測定和調整


              用pH計測定pH,必要時在滅菌前調節pH,除特殊說明外,培養基滅菌后冷卻至25℃時,要求pH的變化不超過0.2pH單位.通常使用濃度約為40g/L(約1 mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L(約1mol/L)的鹽酸溶液調節pH。如果滅菌后調節pH,溶液需滅菌。


              注:商品化培養基在高壓滅菌前后pH可能發生明顯變化,但使用蒸餾水或去離子水時,滅菌前無需調節pH。


              5.分裝


              將配置好的培養基分裝到適當的容器中,容器的體積至少為體積的1.2倍。


              6.滅菌


              ①概述


              培養基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌或過濾滅菌。


              有些培養基無需高壓滅菌,可煮滅菌。如,含亮綠的腸道菌培養基對光和熱特別敏感,應在煮沸后快速冷卻,避光保存。同樣,一些試劑則不需要滅菌,直接使用(參見相關標準或生產廠商的使用說明)。


              ②濕熱滅菌


              濕熱滅菌在高壓鍋或培養基制備器中進行。高壓霉菌一般采用121℃±3℃霉菌15min。如果培養基的體積超過1000mL,要對滅菌條件進行適當的調整。所有操作均要按照標準和使用說明的規定進行。


              注:大容量培養基(>1000mL)滅菌時可能會造成過度加熱。


              加熱后應采取適當的方式冷卻,防止沸溢。這對大容量培養基和敏感性培養基(如含亮綠的培養基)是非常重要的。


              ③過濾滅菌


              過濾滅菌可以在真空負壓或正壓條件下進行。使用無菌設備和0.2um孔徑的濾膜。將過濾裝置的各個部分消毒滅菌,或使用預消毒設備。


              一些濾膜上附著蛋白質或其他物質(如抗生素)。為達到有效過濾,應事先將濾膜用無菌水潤濕。


              ④監測


              應對經濕熱或過濾滅菌的培養基進行監測,尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行監測。


              7.添加劑的制備


              制備含有有毒物質(特別是抗生素)時應小心操作,避免因粉末的擴散造成實驗人員過敏或發生其他不良反應。采用適當的預防措施并小心按照產品使用說明操作。不要使用過期的試劑;抗生素工作溶液現配現用;批量配置的抗生素溶液分裝后向冷凍保存,但解凍后的貯存溶液不可再次冷凍;廠商應提供冷凍對抗生素活性影響的相關資料,也可由使用者自行測定。


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